Technique HPLC
HPLC (High Performance Liquid Chromatography) est une technique chromatographique dont la phase mobile est liquide. Cette méthode de pointe qui est utilisée en chimie analytique permet de séparer et d'identifier les constituants d'un mélange.
Les différentes techniques en HPLC
En fonction du type de la phase stationnaire, la méthode de séparation est différente :
L'HPLC est utilisée pour l'identification, le dosage ou pour des contrôles de routine tels que la vérification de formulation médicamenteuse par comparaison avec un chromatogramme témoin.
Colonnes et détection en HPLC
La colonne est un élément majeur en HPLC. Elles sont généralement constituées d'un tube en acier de 5 à 10 cm supportant des pressions de plus de 400 bars. Des précautions d'utilisation doivent être prises pour assurer une bonne durée de vie de cette pièce et permettre une validation correcte de la technique. Il faut notamment s'assurer d'utiliser des solvants compatibles avec ceux présents dans la colonne et respecter la gamme de pH préconisée par le fabricant.
Dans le cas des colonnes apolaires utilisées en chromatographie de partage, l'élution des composés du mélange s'effectue suivant leur polarité. Un solvant polaire entraînant plus facilement les composés polaires.
La détection des composés est basée sur l'absorption UV. Les détecteurs à barrette de diode permettent de couvrir une large gamme UV et sont donc avantageux.
